1.抗体
特异性:抗体的核心,决定了你检测的是什么靶蛋白(如CD3、CD4、CD8、CXCR5等)。通常是单克隆抗体,有明确的克隆号。
宿主来源:主要是小鼠、大鼠、兔等。在设计多色panel时,需避免二抗引起的交叉反应。
形式:完整抗体、F(ab‘)?片段(减少Fc受体非特异性结合)等。
2.荧光素
这是实现“多色"的关键。荧光素受到特定波长的激光激发后,会发射出特定波长的荧光。
仪器配置:必须匹配流式细胞仪的激光器(如488nm蓝、640nm红、355nm紫外等)和检测滤光片。
抗原表达水平:高表达的抗原(如CD45)用较弱荧光素;低表达的抗原(如某些细胞因子、趋化因子受体)用强荧光素(如PE、APC)。
光谱重叠(溢漏):不同荧光素的发射光谱会有重叠,需要进行荧光补偿。
3.抗体-荧光素偶联物
通过化学方法将荧光素稳定地共价连接到抗体上,形成**终的检测工具。
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